上海實驗細胞周期實驗是上海達為科生物的基礎服務項目之一,由細胞平臺經驗豐富的實驗人員操作完成。
(1)收集對數生長期細胞:棄除舊培養基,用PBS洗滌細胞加入適量胰酶進行消化。加入新鮮的培養基吹打細胞,并將細胞收集于標記好的對應離心管中,室溫1000 rpm離心5 min棄除.上清液。
(2)洗滌細胞:用預冷的PBS重懸上述細胞沉淀,室溫1000 rpm離心5 min將上清液棄除。
(3)固定細胞:將細胞用0.5 ml預冷的PBS溶液重懸,加入預冷的70%乙醇溶液在4°C固定過夜。
(4) PI染色細胞:加入10μl RNase ( 10mg/ml) ,置37 C、5% CO2、飽和濕度恒溫培養箱孵育30min,運用冰浴終止RNase A酶作用;再加入10μ1溴化乙錠(PI, 1mg/ml) 染色,置37 C、5% CO2、飽和濕度恒溫培養箱孵育30min.
(5)流式細胞儀檢測,分析PI熒光的直方圖。